Desarrollo de una prueba de ELISA para descartar respuestas postvacunales con Cepa 19, utilizando un antígeno soluble polisacárido de Brucella Abortus 1119-3

Resumen

El control de brucelosis bovina en áreas de alta prevalencia mediante esquemas de vacunación con Cepa 19 en forma tradicional y no tradicional, hace necesario disponer de pruebas de diagnóstico que puedan diferenciar la respuesta humoral postvacu­nal y no confundirla con la de una infección natural. Utilizando un antígeno polisacárico purificado (PS) de Brucella abortos 1119-3, que en pruebas de in­munodifusión es capaz de descartar la respuesta postvacunal a Cepa I9, se realizan ensayos para establecer una fase sólida en 3 tipos de microplacas de poliestireno, utilizando 3 tampones de sensibili­zación (TS) y diferentes concentraciones de antíge­no y conjugado.

Lograda la fase sólida en las placas Dynatech Immulon2 (D2) y NUNC 269620 (N3), utilizando PBS 0,01 M pH 7,2-7,6, y establecidas las concen­traciones óptimas de antígeno (1:50) y conjugado (1:1.600) se realiza un ELISA indirecto en 3 grupos de sueros bovinos definidos como, positivos por cultivo bacteriológico (48), negativos por origen (78) y vacunados, que eran reactores a pruebas de diagnóstico tradicionales (120).

La prueba de ELISA-PS tuvo en estas condicio­nes, para la placa D2 una sensibilidad de 89,5% y una especificidad de 94,8%, descartando como po­sitivos al 95,8% de los sueros de animales vacuna­dos. La placa N3 entregó una sensibilidad de 95,8% y una especificidad de 100%, descartando como positivos al 88,3% de los sueros de animales vacu­nados.

Se expresa que estudios posteriores deben probar alternativas respecto de otras clases de conjugados y de ensayos en la modalidad de ELISA de compe­tencia para optimizar las cualidades del antígeno.

Palabras claves: Brucella abortos; ELISA; antígeno polisacárido.

Abstract

Three types of 96-wells polystyrene plates and three different coating buffers were tested to obtain a stable solid phase with a Brucella abortos 1119-3 polysaccharide antigen which is able to differentiate naturally infected from S19 vaccinated cattle, when is used in an agar gel immunodiffusion test. Only the plates Dynatech Immulon2 (D2) and NUNC 269620 (N3) and the PBS 0.01M pH 7.2-7.6 used as coating buffer, gave the best results with and antigen dilution of 1:50 and a conjugate dilution of 1:1600. An indirect ELISA was don with these conditions using three groups of sena defined as follows: Positives (48), that had Brucella abortos bacteriological culture and positive reactors to traditional diagnostic tests; Negatives (78), from animals of brucellosis free areas and without S19 vaccination; Vaccinated (120), from animals recently vaccinated with S19 and reactors to traditional diagnostic tests. Plate D2 gave a sensitivity of 89.5% and a specificity of 94.8%, classifying 95.8% of the vaccinated animals as negatives. Plate N3 gave a sensitivity of 95.8% and a specificity, of 100%, classifying 88.3% of the vaccinated animals as negatives.

Key words: Brucella abortos; ELISA; polysaccharide antigen.